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定量PCR仪的选购

荧光定量PCR 的历史:
荧光定量 PCR PCR 的一种。 PCR 仪目的为了基因扩增。在基因扩增中*重要的就是升降温过程,*早的 PCR 就是三个水浴锅 , 一个机械臂,定时抓出反应槽转换水浴锅。 PCR 的结果需要借助其他手段来检测。后来随着定量技术的发展,将 PCR 和检测做成一体,就形成了定量 PCR 仪。由于应用的是荧光技术,同时在每个扩增过程都能实施监控,所以标准的叫法为实时荧光定量 PCR 仪。准确的讲实时荧光定量 PCR 没有自动加样和标本处理系统,只能算半自动的。 PCR 仪简单的讲,就是一个温控设备和一个检测设备。
荧光实时定量 PCR 技术*早是在 1992 年由一位日本人 Higuchi **次报告提出的,他当时想实时地看到 PCR 反应的整个过程,由于当时 EB (溴化乙锭)的广泛使用,*直接想到的标记染料就是 EB ,可以插入到双链核酸中受激发光,在 PCR 反应的退火或延伸时检测掺入到双链核酸中 EB 的含量就能实时监控 PCR 反应的进程,考虑到 PCR 反应的数学函数关系,结合相应的算法,通过加入标准品的方法,就可以对待测样品中的目标基因进行准确定量。这样,在普通 PCR 仪的基础上再配备一个激发和检测的装置,**台实时定量 PCR 仪就诞生了。

荧光定量PCR的技术
定量PCR技术自产生以来,不断发展完善,到目前为止已经非常成熟了。标记方法由*初单一的染料法,发展到了特异性更高的探针法,如 TaqmanMolecular BeaconFret等不同方法的标记探针,其中由于 Taqman探针的广泛使用,实时定量PCR的方法也称为Tagman法。
在过去很长一段时间里,由于PCR检测的灵敏性和不稳定性,容易产生假阳性,国家对这种检测方法在临床上的应用是禁止的。但是随着荧光定量 PCR技术的发展成熟和完善,特别是Taqman方法的广泛使用,使得荧光定量PCR以一种新的PCR检测技术得以在在临床检测上使用,如对
病毒 、病菌及其它致病 微生物 ,致病基因的检测。
Taqman
探针法具有高适应性和可靠性,
实验 结果稳定重复性好;由引物、探针序列和引物探针相互作用关系的双重保证克服了普通PCR的缺陷,现在国家对这方面的限制正逐步解开,目前正在规范相应的法律法规,为荧光定量 PCR技术在分子诊断中的广泛使用做准备工作。
*常用的有三种检测模式:
1、R Green I检测模式。
2
Taqman探针法
3
、杂交探针

荧光定量检测技术的优势
相对于抗原抗体法检测具有以下优势:
1.
研发方便,设计探针和摸定反应条件可以在短时间内完成,顺利的话,只需几次反应和几天的工作量就可以完成一种检测方法的建立。而拿到一个好的抗体至少需要一个完整的**周期,还不考虑筛选获得一个高特异性、高滴度**株的成功几率。
2.
检测灵敏度高,是一个基于PCR的信号放大检测系统。
3.
可以准确定量。

荧光定量PCR的应用
荧光定量检测技术在临床诊断方面很多,主要集中在各种病原体引起
** 的临床诊断,如肝炎类 ** 、性病、与优生优育相关的 ** 以及肺结核等等。
荧光定量PCR的应用不**于临床检测,在基础研究和海关、食品卫生检疫方面的应用前景都相当广泛。
基础研究中,对某一样品中目标基因含量的测定需**相当广泛的,荧光定量PCR技术具有操作方便、反应快速的特点,可以对一些微量样品进行检测。所以在新药开发、超早期感染用**及疗法的研究与开发、**疗法研究、新诊断及检验试剂的开发、血液检验漏检率等方面,荧光定量 PC技术有着广泛的应用前景。
在海关卫生检疫方面,进口的粮食、食品、花果是否安全,是否含有危险或潜在危险的成分,都可以用荧光定量 PCR技术进行检测。一些瘟疫流行地区进口的相关食品也需要进行检测,比如前一段时间,欧洲流行疯牛病,日本流行猪口蹄疫,那么从这些地区进口相应的肉品及肉类加工产品,就要进行食品卫生检疫
在食品卫生检疫方面,如
转基因 食品,由于其是否安全目前尚无定论,因此有些国家明确规定 转基因 食品需要标签标识区分,我国也正在出台类似的法律法规。
此外一些生物类的恐怖袭击等,都可以用荧光定量PCR的方法进行快速检测。
所以荧光定量PCR*明显的对象主要是医院的检验科、中心实验室、临检中心、地方的**控制中心、生物技术公司、血液制品相关的部门。当然科研院所、学校是少不了的。

荧光定量PCR仪技术指标比较
荧光定量PCR简单讲即温控设备pcr和荧光检测系统、计算机及软件系统。
关于温控,包括温度的均一性、升降温速度。主要是介质问题。理想的介质是要求导热性好、比热大、接触紧密。
水浴和油浴:温控的优选,比热大(油比水更大)、与反应物无缝接触,效果当然*好。
缺点不能自动化、小型化,只有*初的水浴锅式使用。
硅加热:Peltier这是使用*普遍的一种,优点:易自动化、速度快、直接加热降温,效果当然好,
缺点1、成本较高;
2
、**其使用的介质是金属,导热虽然好,但是与反应管,很难做到无缝接触,定性时代可以加油,但用荧光定量,由于油有荧光信号不能用。所以在无缝接触上差一些。
空气加热:与反应体系无缝接触
缺点:空气的导热性差、比热小的弱点明显。因此空气加热的要利用离心来产生空气流动,增强导热性,同时使用毛细管,加大接触面积、试剂微量化来弥补。这样做了以后效果还是不错。
同时,使用离心,对标本量增大是有影响的,并且标本量越大,空气比热小的弱点就越明显,所以空气加热的仪器标本量都比较小。使用毛细管后由于反应液与管的接触面积增大,吸附现象更大,因此试剂的通用性差,一般要专门开发,成本高,虽然试剂用量少,但因为是专用试剂,每人份就是以实际量算,并不省试剂。反而增加了毛细管成本。
关于功能,所有的PCR仪功能都大体相同。只有MJ孔间能使用不同温度比较独特,这对于多项目同时检测以及循环参数的调整比较有用。但其实时荧光的仪器刚进入中国不久,

所以这样就可以把市面上的产品分两类,半导体Peltier和空气。其中罗氏的LightCyclerCorbertRotorGene是用空气加热,其余是Peltier
当然加热还有电热丝+半导体,致冷还有压缩机
空气的加热的标本量为32/批,其他96/批,iCycler 能达到384/批,这也难怪,是扩增仪上加装定量模块而成,所以如果标本量大,建议不要用罗氏。
 

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